T細(xì)胞在癌癥、感染和自身免疫性疾病相關(guān)的不同類型的免疫反應(yīng)中都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞的特異性相互作用往往決定了T細(xì)胞的命運(yùn)并調(diào)節(jié)其抗腫瘤反應(yīng)。基礎(chǔ)及臨床研究發(fā)現(xiàn)了許多調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能的免疫調(diào)節(jié)分子，其中，表達(dá)在T細(xì)胞上的免疫檢查點(diǎn)分子通過激活信號（共刺激分子）或抑制信號（共抑制分子）調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能，在免疫系統(tǒng)中起著核心作用。目前，靶向T細(xì)胞功能的免疫檢查點(diǎn)抗體療法已經(jīng)獲得了激動(dòng)人心的療效，取得了很大的成功，其中包括針對程序性細(xì)胞死亡蛋白1（PD-1）及其配體PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等單抗藥物已廣泛運(yùn)用于黑色素瘤、轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各種腫瘤患者。

在迄今發(fā)現(xiàn)的免疫檢查點(diǎn)分子中，CTLA-4抑制T細(xì)胞的作用機(jī)制是為人們最深入了解的機(jī)制之一。CTLA-4，又稱CD152，是一種跨膜糖蛋白，可與CD28競爭性地結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，當(dāng)與配體結(jié)合時(shí)，可作為T細(xì)胞激活的“關(guān)閉”開關(guān)，針對CTLA4的單抗Ipilimumab是一個(gè)被成功用于黑色素瘤患者的免疫檢查點(diǎn)藥物。

PD-1（也稱為CD279），是一種T細(xì)胞表面受體，通過與配體其PD-L1和PD-L2的相互作用對抑制T細(xì)胞活性起著重要作用。與CTLA-4信號類似，PD-1結(jié)合其配體抑制T細(xì)胞增殖，細(xì)胞因子如干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素2（IL-2）的產(chǎn)生，并減少T細(xì)胞的存活，但與CTLA-4不同的是，它主要調(diào)節(jié)組織和腫瘤內(nèi)的效應(yīng)T細(xì)胞活性，而不影響淋巴器官中的T細(xì)胞活化。

藥物研發(fā)現(xiàn)狀

盡管通過抗體藥物對免疫檢查點(diǎn)信號阻斷在癌癥治療中取得了顯著的成功，但目前，大多數(shù)患者仍不能從單一靶點(diǎn)的阻斷中獲益。例如，雖然臨床上針對PD-1和CTLA-4通路的抗體藥物，已被用于多種癌癥適應(yīng)癥，但大多數(shù)患者單一使用PD-1或CTLA-4阻斷劑并無效果。因此，針對一種以上的免疫檢查點(diǎn)抗原的抗體組合療法被認(rèn)為是一種潛在的有效策略。臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，聯(lián)合阻斷CTLA-4和PD-1信號通路可延長B16黑色素瘤模型和K7M2轉(zhuǎn)移性骨肉瘤模型的動(dòng)物存活時(shí)間，而單獨(dú)使用抗體阻斷CTLA-4或PD-1則效果有限。而在臨床上，PD-1/L1與CTLA4的抗體組合療法也已被廣泛研究及應(yīng)用，早在2015年，Nivolimab+Ipilimumab的聯(lián)合方案即獲美國FDA批準(zhǔn)治療黑色素瘤，成為上市的雙I-O聯(lián)合方案，此后又有多個(gè)適應(yīng)癥獲批（腎癌、肝癌及結(jié)直腸癌等）。

此外，阿斯利康的I藥（Imfinzi）聯(lián)合tremelimumab也在不同癌種上獲得了積極的臨床效果。此外，國內(nèi)一些藥企也在開展多個(gè)類似的聯(lián)合用藥的臨床實(shí)驗(yàn)，如和鉑醫(yī)藥就其CTLA4抗體HBM4003與君實(shí)生物的PD-1單抗聯(lián)合治療方案已經(jīng)在黑色素瘤，晚期非小細(xì)胞肺癌，晚期肝細(xì)胞癌，晚期神經(jīng)內(nèi)分泌瘤/癌以及其它多種實(shí)體瘤上開展了臨床實(shí)驗(yàn)；而祐和醫(yī)藥也在前幾日宣布NMPA批準(zhǔn)了其在研創(chuàng)新藥抗CD40單抗YH003、抗CTLA-4單抗YH001聯(lián)合抗PD-1帕博利珠人源化單克隆抗體注射液的一期臨床試驗(yàn)IND申請。

盡管CTLA-4和PD-1/L1聯(lián)合使用療法取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，但在有些臨床案例中兩者聯(lián)合并沒有獲得倍增的療效，反而增加了毒副作用的風(fēng)險(xiǎn)，這既可能取決于不同的臨床方案和病人選擇，也與同時(shí)使用兩種藥物產(chǎn)生的雙免疫毒性相關(guān)，另外聯(lián)合使用往往價(jià)格昂貴，對于腫瘤患者來說也是巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為了進(jìn)一步提高療效，減少毒副作用，隨著近年來雙抗技術(shù)的發(fā)展，同時(shí)靶向CTLA4和PD-1/L1的雙抗藥物也在積極的開發(fā)中，康方生物的AK104是優(yōu)先進(jìn)入臨床試驗(yàn)的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物，該藥于2017年10在澳大利亞進(jìn)入I期臨床,在國內(nèi)，去年8月NMPA也授予其新藥上市申請的優(yōu)先審評資格，用于治療復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性宮頸癌，有望成為一個(gè)獲得批準(zhǔn)上市的CTLA4/PD-1雙特異性抗體藥物;而國外藥企阿斯利康開發(fā)的PD-1 x CTLA-4雙抗藥物MEDI5752也緊隨其后，于2018年4月在澳大利亞進(jìn)入臨床；而康寧杰瑞開發(fā)的KN046則是一款同時(shí)靶向CTLA-4和PD-L1的雙抗藥物，目前該藥物在澳洲，中國，美國也均已獲批臨床試驗(yàn)，處于不同的臨床試驗(yàn)階段。
 

針對CTLA-4&PD-1/L1抗體藥物的研發(fā)，科佰生物特別開發(fā)了CTLA&PD-1/L1雙靶點(diǎn)細(xì)胞篩選模型，可從細(xì)胞水平功能性的測活及評估CTLA4&PD-1/L1聯(lián)合用藥以及雙特性抗體的藥效，產(chǎn)品信息及相關(guān)數(shù)據(jù)如下：

PD-1/CTLA4 Dual Effector Reporter Cells CBP74150

PD-L1/CD80&CD86 aAPC Cells CBP74151

Fig 1. The CTLA-4+PD-1 Combination Reporter Assay reflects the mechanism of action of biologics designed to block the PD-1/PD-L1 and CTLA-4/CD80&86 interaction. PD-1/CTLA-4 Dual Effector Cells were incubated with PD-L1/CD80&86 aAPC Cells in the presence of serial titrations of Anti-CTLA-4, Anti-PD-1 or both of the blocking Abs as indicated.

藥物靶點(diǎn)模型

報(bào)告基因細(xì)胞模型可以很好的反映分子作用機(jī)制，同時(shí)具備更小的變異性和更好的可操作性，已被中檢院及藥企廣泛應(yīng)用于抗體藥物生物活性的檢定，對于藥物研發(fā)、質(zhì)量控制、批次放行都有重要意義。

科佰生物公司十分重視研發(fā)創(chuàng)新，憑借細(xì)胞功能改造技術(shù)、高精度和靈活的基因編輯工具平臺，提供包括激酶，GPCR，免疫治療，耐藥等多類疾病靶點(diǎn)的藥物檢測細(xì)胞模型。目前已覆蓋四百多株現(xiàn)貨細(xì)胞模型，同時(shí)提供高質(zhì)量的Cell-base生物測活服務(wù)。


免疫治療靶點(diǎn)細(xì)胞模型

● T Cells Activation Assays (NFAT, IL2, NFkB….)

● Fc Effectors Activity Assays ( ADCC, ADCPs…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Inhibitory Targets (PD-1/PD-L1&2, TIGIT/CD155, CTLA4, LAG3, LILRB4/APOE, CD112R/CD112, SIRPa/CD47, TIM-3, BTLA/HVEM, CD161/CLEC2D, TIGIT&PD-1, LAG3&PD-1, CTLA4&PD-1 Combi…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Stimulatory Targets (OX40, 4-1BB, GITR, CD27, HVEM/LIGHT, CD28…)

● Cytokines and Growth Factor Assays ( BCMA, TGFβ, EGF, CSF1R,IL2, 15, IL4&13, IL6, IL11, IL12, IL23, IL36, IFNs,RANKL…)